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私たちのICCの手続きの日2、我々は実行する、私たちの二次抗体を加えます 任意の二重標識や核ラベリングステップ、
スライドに私達のカバースリップをマウントして、私達の抗体の画像を取得 蛍光顕微鏡。 最初の 我々は、細胞を洗浄することにより、以下の一次抗体液を吸引
5分ごとにPBSTで3回。 次のページにバインドしますfloraform標識二次抗体を作製 一次抗体。 二次ブロッキングバッファーを希釈
データシートで指定されたおすすめの希釈で 室温で1時間インキュベートする。
ホイルでプレートを覆うことの劣化感受性色素を防ぐことができます。 細胞の洗浄に続いて二次抗体溶液を吸引
PBSTで3回 5分間ずつ。 オプションの手順として独立したプライマリおよびセカンダリペアを使用することができます それのために別のフロアを使用して第2のエピトープを可視化する。
また、このようなDAPIなどのDNA結合色素が必要とせずに適用することができます 二次抗体。 倍増する方法については、完全な記述ノーバスプロトコルを参照して、
トリプルラベル。 カバーガラスは現在、顕微鏡スライド上にマウントする準備が整いました。 ゆっくりして洗浄したスライドを取ると、退色封入剤の一滴を免ずる
ピペットのプランジャーを下にダイヤルする。 慎重に、井戸からカバースリップを削除
過剰な洗浄が垂れることができる そして細胞がスライド上に伏せて置きます。
明確な爪磨きをカバースリップを封印し、それを防ぐために使用することができます 乾燥。 スライドは現在、顕微鏡下で可視化すること、または-20℃で保存することができます
ダークスライドボックスやスライド帳で摂氏4度。 各スライドは、顕微鏡の光の意志の側近にさらされる時間を制限する
蛍光信号の延長に と退色を防止します。